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Simple-Fect转染试剂
作者：admin 上传时间：2024-04-07 浏览次数：次 返回上级
货号：TD-ZR-001
体积：1.5ml（1mg/ml）
储存条件：在2-8°C下储存
有效期：5年
预期用途：仅供科研使用
Simple-Fect转染试剂是一种用于将核酸（DNA）转染到真核细胞中的新型阳离子聚合物试剂，具有以下优点：
在不同细胞类型和形式中具有高转染效率。
在含有血清的培养基中，Simple-Fect/DNA复合物可以直接添加到培养基中。
转染后，不需要更换培养基和去除Simple-Fect/DNA复合物。
质粒DNA转染粘附细胞
1.1 细胞培养
在使用Simple-Fect转染试剂转染的前一天使用不含抗生素的培养基培养细胞，可提高细胞的转染效率达70-90%。
培养体系 | 需转染的 细胞数量 | 每个孔或板的 表面积(cm2) | 孔板或平皿 的体积(ml) |
96孔板 | 1×104-1.7×104 | 0.3 | 0.1-0.2ml |
48孔板 | 2.5×104-5×104 | 1 | 0.25-0.5ml |
24孔板 | 0.5×105-1×105 | 1.9 | 0.5-1ml |
12孔板 | 0.8×105-2×105 | 3.8 | 1-2ml |
6孔板 | 2×105-4×105 | 9.4 | 2-4ml |
6 cm平皿 | 4×105-8×105 | 28 | 5-10ml |
10 cm平皿 | 1×106-2×106 | 78.5 | 10-20ml |
14 cm平皿 | 2×106-5×106 | 153 | 20-40ml |
1.2 转染实验流程
以6 cm培养皿为例。如需放大或缩小体系，参见下表（《不同培养体系参考表》）。
将4µg DNA加入500µl DMEM（不含血清）培养基中，吹打混匀。
Simple-Fect试剂在使用前需先瞬时离心，使试剂置于管底。将12µl Simple-Fect试剂加入稀释好的DNA中，吹打混匀。
在室温下培养15到20分钟（在此期间每个培养皿更换2ml含血清的培养基）。
将500µl Simple-Fect/DNA复合物加入含有细胞的培养皿中，轻轻前后左右晃动培养皿，使转染混合物与细胞充分接触。
将培养皿放入37°C的CO2培养箱中培养4小时后再向培养皿中加入3ml含有血清的新鲜培养基。
细胞在37°C的CO2培养箱中培养24-48小时后即可测试基因表达。
不同培养体系参考表
培养体系 | DNA量（ug） | 无血清培养基 体积（μl） | Simple-Fect 试剂体积（μl） |
96孔板 | 0.05-0.2 | 20 | 0.15-0.6 |
48孔板 | 0.1-0.4 | 50 | 0.6-1.5 |
24孔板 | 0.2-0.5 | 100 | 1.5-3.0 |
12孔板 | 0.5-1.5 | 100 | 3.0-4.5 |
6孔板 | 1-3 | 200 | 4.5-9 |
6 cm平皿 | 4 | 500 | 9-12 |
10 cm平皿 | 4-8 | 1000 | 12-24 |
14 cm平皿 | 8-10 | 2000 | 24-30 |
1.3 转染结果
GFP-293T 24小时
GFP-HCT116 48小时
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