服务项目SERVICES AVAILABLE

天德生物经过10多年的发展，获得了上百种细胞株和四十余种原代细胞培养经验，并建立了庞大的细胞库及原代培养资料库。细胞平台有资深实验员、规范的SOP操作文件，万级净化细胞房，这些条件为保质保量完成每个客户的实验提供了保障。 同时，天德生物结合多年原代及传代细胞培养经验，结合平台已有的技术优势，建立了完善的体外药筛实验，并引进RTCA(Real-time cellular Analysis，实时无标记细胞记录仪），在药筛过程中，全程实时记录细胞真实状况，为药筛提供真实精准的实验数据。

无菌操作注意事项

细胞培养一定要保持工作区的无菌清洁，先用紫外灯和臭氧杀菌1h，然后通风30min，操作前需要换细胞间专用拖鞋，双手带上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒，穿上实验服，戴上一次性口罩和帽子，操作时不能大声说话，整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。

原代细胞培养案例——大鼠神经元细胞的原代分离培养

1、操作方法  

（1）75%（体积分数）酒精消毒新生24h内的健康SD大鼠，在无菌条件下脱颈死，剪开头皮及颅骨，取出脑组织，置于盛冷的pH7.2，无钙、镁的D-Hank's液的平皿中（下置冰袋）。

（2）无菌分离海马组织,保持脑组织背面朝上，在镜下小心翻开大脑皮质，暴露海马，用眼科剪或尖镊分离海马周围组织，取出放入盛有D-Hank's液的平皿中。

（3）用虹膜剪将组织剪切成1mm3左右的组织块，0.125%胰蛋白酶消化，37℃作用 20min，期间振摇 2~3 次。

（4）弃去上清液，加入完全接种液终止消化，漂洗2次。巴斯德吸管轻轻吹打 20次，制成细胞悬液，静置 2min。

（5）悬液收集于新的离心管，离心（1000rpm，10 min，4℃），弃去上清液。加入完全培养液重悬，200目不锈钢网过滤。

（6）将滤液进行台盼蓝拒染试验，血细胞计数板镜下计数。以8.0 ×104至1.0 ×105/mL的密度将细胞以400µL/孔接种到预先用D-多聚赖氨酸包被的24孔培养板或100µL/孔接种 96 孔培养板。

（7）置37℃、5%CO2培养箱培养4-6h，全量更换为无血清培养液。

（8）体外培养第3d，加入Ara-C-工作液，以抑制非神经细胞过度增殖，作用 24 h后吸出。

（9）此后每 3d半量换液1次 , 体外培养第 7～21d的细胞用于实验。

2、细胞鉴定以及注意事项

3、注意事项

a、分离神经元细胞选择出生三天前的新生鼠，细胞活性更好，不适宜用成年鼠；

b、组织需多次分步消化，吹打细胞时不可用力太大；

c、不可使用胎牛血清，使用生长因子及B27可提高细胞纯度；d、神经元细胞不适合传代。

多种原代细胞培养结果图